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在配置颗粒培养基过程中偶尔会出现不凝固一摇晃就破碎现象原因

点击次数:204 发布时间:2022-05-12
  在微生物培养时经常会用到颗粒培养基,但是,在配制培养基过程中偶尔会出现不凝固、半凝固或者一摇晃培养基就破碎的现象,这是什么原因?
 
  大量文献指出,琼脂的凝固程度主要受到PH值和琼脂含量的影响,PH值较低(≤4.0)时,PH值是影响凝固等级的主要因素;PH值较高(5.0~8.0)时,琼脂浓度是影响凝固等级的主要因素。
 
  药典上培养基配方中明确规定了PH值和琼脂含量,如配制操作正常,凝固应是不会出现问题的。为此,我们针对培养基出现的凝固异常进行了分析及试验:
 
  一、培养基PH值问题:培养基灭菌前后PH值有何变化?经查阅大量相关学术研究,不同培养基灭菌前后PH普遍有这样的变化超势:高压灭菌前pH值4.5-8.0的培养基灭菌后pH值变化较小,偏酸性的略上升,偏碱性的略下降。但酸性或碱性较强的培养基灭菌前后PH值变化较大。因我们常使用的培养基pH值均在4.5-8.0范围内,所以偶尔出现的培养基凝固不好应不是PH值影响的。
 
  二、琼脂问题:琼脂是培养基zui常用的凝固剂,是一种海藻多糖,PH在4-10之间才会形成凝胶,且其凝胶强度和琼脂糖的浓度有关。目前我们实验室使用的均是成熟配方的培养基,为什么会偶尔出现凝固不好的现象呢?
 
  在仔细核查了琼脂粉的生产厂家、批号、保质期及配制时的称量、溶解、定容和转移等过程。排除了琼脂粉质量问题,但发现培养基分装准备高温灭菌时,有部分经开水溶解的琼脂呈细小颗粒状沉在瓶底,即未完全溶解,后查阅资料发现,琼脂加热至95℃时才开始溶解,说明我们用热水溶解琼脂时,琼脂未能完全溶解,这可能是导致培养基难凝固的原因。
 
  于是我们在配制颗粒培养基时,先将琼脂煮沸5分钟后再分装、灭菌,后培养基冷却至40℃时能完全凝固。自琼脂溶解方式改变后,便未再出现培养基不凝固、半凝固或者一摇晃培养基就破碎的现象。

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