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干粉培养基在使用之前必须进行灭菌处理

点击次数:306 发布时间:2022-03-15
   干粉培养基在使用之前必须进行灭菌处理,将其所含活菌全部杀死或全部除去。常用的灭菌方法有过滤除菌、干热灭菌、湿热灭菌及辐照灭菌等。

  其中,湿热灭菌法又包括四种方式:煮沸法、流动蒸汽灭菌法、间歇灭菌法和压力蒸汽灭菌法。通常来说,使用比较多的是压力蒸汽灭菌法。

  但是对于有些培养基来说,高压条件会损坏培养基中的某些成分,不利于培养基的使用,所以只能采用煮沸灭菌的处理方法。

  接下来主要就煮沸灭菌方法进行讨论,话不多说一起看看吧。

  一、煮沸灭菌的常见表述

  有关煮沸灭菌的描述,通常有如下几种方式:

  a、称取本品41.5g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,煮沸不要超过2分钟。无需高压灭菌。临用时制备,不得超过3小时。(参考VRBA培养基:点击查看)

  b、称取本品50.3g,加入1000ml蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解,冷至45-50℃,摇匀,倾入无菌平皿备用。无需高压灭菌。(参考BS培养基:点击查看)

  c、称取本品89g,煮沸溶解于1000ml蒸馏水中,冷至45-50℃时,倾入无菌平皿,备用。注:无需高压灭菌。(参考TCBS培养基:点击查看)

  d、称取本品57g,加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中,不要过分加热,冷至50-55℃时,倾入无菌平皿,部分开盖干燥2h,然后盖上,备用。无需高压灭菌。在 24小时内使用。(参考XLD培养基:点击查看)

  这些方法描述中,都特别强调“无需高压灭菌”、“不要过分加热”、“煮沸充分溶解”,那么究竟该怎样操作,才能达到既灭菌完全又尽量降低对培养基的破坏呢?

  二、煮沸灭菌的实际操作

  1、关于煮沸方式,有人提出可以隔水煮沸,但经过反复试验,发现这种煮沸方式存在两大弊端:①温度不够,达不到灭菌效果;②经隔水煮沸的含琼脂培养基,在水浴的过程中易出现分层现象。

  2、为了对培养基进行有效煮沸灭菌,根据我们实践摸索,建议如下操作:

  ①准备好电磁炉和搪瓷缸(不要用铁质容器);

  ②将培养基按比例加水,称量至搪瓷缸中,用玻璃棒不断搅拌,直至完全溶解、无明显团状物或颗粒;

  ③将搪瓷缸置于电磁炉上,大火烧开,期间持续搅拌,避免糊底;当液面完全沸腾后,立即将搪瓷缸从电磁炉上拿开,算是一次煮沸操作;液面回落后,立即放回电磁炉,重复上面的步骤;总共煮沸3次即可。

  ④将煮好的培养基冷却至需要的温度,进行倾注平皿等操作。

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