干粉培养基在使用之前必须进行灭菌处理

　　其中，湿热灭菌法又包括四种方式：煮沸法、流动蒸汽灭菌法、间歇灭菌法和压力蒸汽灭菌法。通常来说，使用比较多的是压力蒸汽灭菌法。

　　但是对于有些培养基来说，高压条件会损坏培养基中的某些成分，不利于培养基的使用，所以只能采用煮沸灭菌的处理方法。

　　接下来主要就煮沸灭菌方法进行讨论，话不多说一起看看吧。

　　一、煮沸灭菌的常见表述

　　有关煮沸灭菌的描述，通常有如下几种方式：

　　a、称取本品41.5g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，煮沸不要超过2分钟。无需高压灭菌。临用时制备，不得超过3小时。(参考VRBA培养基：点击查看)

　　b、称取本品50.3g，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸至*溶解，冷至45-50℃，摇匀，倾入无菌平皿备用。无需高压灭菌。(参考BS培养基：点击查看)

　　c、称取本品89g，煮沸溶解于1000ml蒸馏水中，冷至45-50℃时，倾入无菌平皿，备用。注：无需高压灭菌。(参考TCBS培养基：点击查看)

　　d、称取本品57g，加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中，不要过分加热，冷至50-55℃时，倾入无菌平皿,部分开盖干燥2h，然后盖上，备用。无需高压灭菌。在 24小时内使用。(参考XLD培养基：点击查看)

　　这些方法描述中，都特别强调“无需高压灭菌”、“不要过分加热”、“煮沸充分溶解”，那么究竟该怎样操作，才能达到既灭菌*又尽量降低对培养基的破坏呢?

　　二、煮沸灭菌的实际操作

　　1、关于煮沸方式，有人提出可以隔水煮沸，但经过反复试验，发现这种煮沸方式存在两大弊端：①温度不够，达不到灭菌效果;②经隔水煮沸的含琼脂培养基，在水浴的过程中易出现分层现象。

　　2、为了对培养基进行有效煮沸灭菌，根据我们实践摸索，建议如下操作：

　　①准备好电磁炉和搪瓷缸(不要用铁质容器);

　　②将培养基按比例加水，称量至搪瓷缸中，用玻璃棒不断搅拌，直至*溶解、无明显团状物或颗粒;

　　③将搪瓷缸置于电磁炉上，大火烧开，期间持续搅拌，避免糊底;当液面*沸腾后，立即将搪瓷缸从电磁炉上拿开，算是一次煮沸操作;液面回落后，立即放回电磁炉，重复上面的步骤;总共煮沸3次即可。

　　④将煮好的培养基冷却至需要的温度，进行倾注平皿等操作。